El método FCS FCS es un método de medición basado en fluorescencia.
Las moléculas fluorescentes que pasan a través de un láser fijo fuertemente enfocado se excitan por la emisión de fluorescencia. Después de pasar un agujero estelar confocal, los fotones emitidos se registran usando detectores muy sensibles.
- Parámetros cuantitativos derivados de la curva de autocorrelación
Las partículas en movimiento dan lugar a fluctuaciones de intensidad. Una autocorrelación de esto revela información sobre la escala molecular: la amplitud de la curva de correlación muestra el número de partícula. El tiempo en el punto de inflexión contiene información sobre la movilidad de partículas. Finalmente, la pendiente y la forma de la curva reflejan el tipo de difusión. La concentración de partículas, la masa de partículas, la viscosidad y la fracción unida se pueden derivar de estos parámetros.
Principio de adquisición y análisis de datos FCS
- La iluminación láser en un punto fijo de interés (estacionamiento de haz) excita partículas fluorescentes en el volumen de excitación. El movimiento de partículas dentro y fuera del volumen confocal causa fluctuaciones de intensidad.
- Registro de fluctuaciones de intensidad usando detectores en modo de conteo de fotones individuales.
- Cálculo de la función de correlación.
- Ajuste del modelo biofísico correspondiente a la curva de correlación. Obtener parámetros de interés:
- Concentración de partículas
- Coeficiente de difusión
- Viscosidad
- Masa molecular
- Constante de enlace
- Propiedades foto-físicas
Fuente: Leica Microsystems
